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RNase R
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2018-03-29 | 16276 次瀏覽 | 分享到:



Ribonuclease R (RNase R)

貨號

試劑

規格

保存條件

R0301

RNase R (20U/μL)

500 U

-20

10X Reaction Buffer

1 mL


RNase R (Ribonuclease R)是一種來源于大腸桿菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶,可從3’-5’方向將RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化幾乎所有的線性RNA分子,但不易消化環形RNA、套索結構或3’突出末端少于7個核苷酸的雙鏈RNA分子。RNase R常用于基因表達和可變剪切研究,可消化線性RNA以使環形RNA (circRNAs)或套索結構RNA (lariat RNA)得到富集。






產品組分:

Storage Buffer

50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1%

Triton? X-100, 50% Glycerol

10X Reaction Buffer

200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2


單位定義
標準反應體系下,于 37℃,10 min 1 μg poly(A)轉化成酸溶核苷酸所需的酶量定義為一個活力單位(U)


反應體系

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。

注:1RNase R 0.1-0.5 mM Mg2+存在時活性最高,反應中 EDTA 可能降低 RNase R 活性,此時可額外添加 MgCl2 使 Mg2+ 濃度最高達到 0.5 mM2孵育后可于 70℃,10 min 使酶失活,再進行下游實驗如逆轉錄;也可不滅活,直接純化后進行下游實驗。


質量
控制:
SDS-PAGE 檢測純度>99%Total RNA RNase R 消化后進行 RT-qPCR 檢測,線性 RNA 豐度明顯降低, 環形RNA 豐度基本不變。



參考文獻:
1. Cheng ZF, Deutscher MP. J. Biol. Chem. 2002; 277:21624–21629.
2.Suzuki H et al.. Nucleic Acids Res. 2006; 34(8), e63.
3.Vincent HA, Deutscher MP. J Biol Chem. 2006 Oct 6; 281(40):2976975.

性能比較-
RNA電泳檢

        將10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之后直接進行電泳檢測,結果顯示RNase R+28/18/5S條帶變淡不可見表明RNase Rtotal RNA消化作用。吉賽和公司e或公司aRNase Rtotal RNA化效果相當。


     性能比較-RT-qPCR檢測
 



10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之后進行RT-qPCR實驗,結果顯示RNase R+β-actinFGFR2豐度都明顯降低表明RNase R消化線性RNA。吉賽和公司eRNase R線性RNA消化效果相當,優于公司aRNase R




將10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中,于37℃孵育30 min,之后進行RT-qPCR實驗,結果顯示RNase R+ 組中hsa_circFOXO3_002和hsa_circMTO1_001的豐度基本不變,表明環形RNA耐受RNase R的消化。吉賽和公司e或公司a的RNase R效果相當。



說明書下載:

客戶文章:

1. hsa_circ_0006168 sponges miR-100 and regulates mTOR to promote the proliferation, migration and invasion of esophageal squamous cell carcinoma.

2. Systematic identification of circular RNAs and corresponding regulatory networks unveil their potential roles in the midgut of Apis cerana cerana workers .

3 .Identification and functional prediction of circRNAs in Populus Euphratica Oliv. heteromorphic leaves.

4. Genome-wide analysis of RNAs associated with Populus euphratica Oliv. heterophyll morphogenesis.



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